產(chǎn)品名稱(chēng)：原代神經(jīng)母細(xì)胞瘤條件重編程培養(yǎng)基(Human Neuroblastoma Conditional Reprogramming Medium)
產(chǎn)品說(shuō)明：原代神經(jīng)母細(xì)胞瘤條件重編程培養(yǎng)基（Human Neuroblastoma Conditional Reprogramming Medium）是一種為促進(jìn)人源神經(jīng)母細(xì)胞瘤原代細(xì)胞體外生長(zhǎng)而開(kāi)發(fā)的培養(yǎng)基。它是一種無(wú)菌的液體混合系統(tǒng)，含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機(jī)和無(wú)機(jī)化合物、激素、生長(zhǎng)因子、微量礦物質(zhì)等。該培養(yǎng)基產(chǎn)品基于碳酸氫鹽的緩沖體系，在5%CO2、37℃培養(yǎng)箱中平衡時(shí)，pH值為7.4。該培養(yǎng)基的配方可以提供一個(gè)理想人源神經(jīng)母細(xì)胞瘤原代細(xì)胞體外培養(yǎng)環(huán)境，選擇性地促進(jìn)體外人源神經(jīng)母細(xì)胞瘤原代細(xì)胞的生長(zhǎng)。實(shí)現(xiàn)了體外培養(yǎng)周期短、成本可控、操作便捷的目的，提高了腫瘤組織原代細(xì)胞培養(yǎng)成功率。

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：
(1) 培養(yǎng)成功率高

(2) 體外持續(xù)擴(kuò)增

(3) 保持腫瘤原始病理特征

(4) 藥敏結(jié)果宇臨床數(shù)據(jù)接近

使用說(shuō)明
?使用前準(zhǔn)備
(1) y射線照射過(guò)的NIH-3T3細(xì)胞（40Gy輻照）。
(2)15mL無(wú)菌離心管、移液器、移液管、無(wú)菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺(tái)中紫外照射30min。提前30min從4℃冰箱取出原代細(xì)胞培養(yǎng)基平衡至室溫。
?神經(jīng)母細(xì)胞瘤原代細(xì)胞培養(yǎng)
（1）獲取的人源神經(jīng)母細(xì)胞瘤原代細(xì)胞，按照表1中細(xì)胞數(shù)接種在合適的培養(yǎng)器皿中，加入y射線輻照后的NIH-3T3細(xì)胞（添加滋養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量如表1和表2所示）。
（2）原代細(xì)胞初次接種后2~3天勿動(dòng)（利于細(xì)胞貼壁），培養(yǎng)過(guò)程中若培養(yǎng)基顏色變黃但細(xì)胞未長(zhǎng)滿(mǎn)時(shí)可進(jìn)行半換液。
（3）鏡下觀察細(xì)胞未長(zhǎng)滿(mǎn)但3T3細(xì)胞已不足時(shí)，適量補(bǔ)充γ 射線輻照后的3T3細(xì)胞（一般補(bǔ)加初始數(shù)目的一半）。

注∶針對(duì)實(shí)體瘤樣本，細(xì)胞粒徑大于12微米進(jìn)行計(jì)數(shù);倍增時(shí)間>48小時(shí)則定義為增殖較慢的細(xì)胞;對(duì)于增殖較快細(xì)胞，可以綜合倍增時(shí)間、接種器皿的規(guī)格以及培養(yǎng)周期來(lái)估算接種的細(xì)胞數(shù)量;表格供參考，具體實(shí)驗(yàn)具體對(duì)待。
?神經(jīng)母細(xì)胞瘤原代細(xì)胞傳代
（1）鏡下觀察細(xì)胞形成克隆及神經(jīng)元樣細(xì)胞增殖，且匯合度85~95%時(shí)即可傳代。
（2）培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞，棄舊培養(yǎng)液，0.05%胰酶洗滌5秒后吸盡，再加入適量0.05%胰酶，37℃孵育，2~5 min后拿出輕拍培養(yǎng)瓶/板側(cè)面，顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況。
（3）細(xì)胞消化至細(xì)胞變圓并開(kāi)始脫落時(shí)用原代細(xì)胞終止培養(yǎng)基終止消化，并將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管中，1500 rpm,3 min。
（4）棄上清，以1~5mL條件培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，活細(xì)胞計(jì)數(shù)，將細(xì)胞懸液按適合的細(xì)胞密度接種于培養(yǎng)瓶/板，加入y射線輻照后的NIH-3T3細(xì)胞（不同規(guī)格培養(yǎng)瓶/板底面積、接種原代細(xì)胞數(shù)量、添加滋養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量如表1、表2 所示），補(bǔ)加條件培養(yǎng)基至所需體積，十字交叉混勻，培養(yǎng)容器75%表面消毒后置37℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。其他步驟同上。
注意事項(xiàng)：
1.本產(chǎn)品在使用前需平衡至室溫。
2.本產(chǎn)品中含有胎牛血清和原代細(xì)胞專(zhuān)用抗生素，如無(wú)特別需要不用額外再添加血清和雙抗，可直接使用。
3.樣本需為腫瘤組織，且腫瘤細(xì)胞比例越高（>50%），培養(yǎng)成功率越高。
4.為保持本產(chǎn)品的理想使用效果，不宜將其過(guò)夜放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。
5.請(qǐng)于保質(zhì)期內(nèi)使用本產(chǎn)品，超出保質(zhì)期，必須放棄使用。
6.原代細(xì)胞初次接種時(shí)會(huì)貼壁較慢和貼壁不牢，若無(wú)必要，盡量減少取出觀察的次數(shù)，建議2~3天一次。
7.傳代消化時(shí)切記不要消化過(guò)度，不宜超過(guò)5min，對(duì)細(xì)胞造成損傷，影響細(xì)胞狀態(tài)。
8.接種細(xì)胞時(shí)注意細(xì)胞密度，不可過(guò)稀或過(guò)密。
9.使用產(chǎn)品時(shí)應(yīng)注意無(wú)菌操作，避免污染。
10.本產(chǎn)品僅用于科研用途，不能用于體外診斷。