逆轉(zhuǎn)錄酶是從RNA模板合成互補(bǔ)DNA鏈(cDNA)過程中的必需試劑。它的主要作用是指導(dǎo)第一鏈cDNA的合成,然后可直接作為PCR, qPCR, LAMP或測序等檢測的模板。
決定最佳逆轉(zhuǎn)錄酶的幾個關(guān)鍵重要特性:
1. RNase H 活性: RNase H(核糖核酸酶H)是一種切割并降解RNA-DNA雜交鏈中RNA鏈的酶,同時可以保持DNA鏈的完整。如果逆轉(zhuǎn)錄酶的RNA酶H活性過高,則會導(dǎo)致RNA模板的過度降解,引起cDNA合成不完整或效率低下。具有低RNase H活性的逆轉(zhuǎn)錄酶可以最大限度地減少反應(yīng)中RNA分子的非特異性降解,提高cDNA合成的特異性和保真度。
2. 持續(xù)合成能力: 持續(xù)合成能力是指在酶的單個結(jié)合事件中摻入的核苷酸數(shù)量。持續(xù)合成能力強(qiáng)的逆轉(zhuǎn)錄酶可以在更短的反應(yīng)時間內(nèi)合成更長的cDNA 鏈。大多數(shù)經(jīng)過改造的逆轉(zhuǎn)錄酶具有更強(qiáng)的合成能力(比野生型MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶高65倍)。
3. 熱穩(wěn)定性: 耐高溫能力是cDNA合成的一個重要方面,因為高溫有助于使具有強(qiáng)二級結(jié)構(gòu)和/或高GC含量的RNA變性,從而實現(xiàn)全長cDNA合成和更高產(chǎn)量。野生型MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶在37°C下表現(xiàn)最佳,而加工改造后的熱穩(wěn)定性MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶可以承受高達(dá)55°C的溫度,而不會對逆轉(zhuǎn)錄效率產(chǎn)生負(fù)面影響。
邁迪安提供了多種不同的逆轉(zhuǎn)錄酶,每種都有du特的產(chǎn)品特性,例如高溫穩(wěn)定性或可用于開發(fā)常溫穩(wěn)定檢測的凍干兼容。下面讓我們一起來看看Meridian MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶的產(chǎn)品列表吧!
邁迪安(Meridian)熱穩(wěn)定MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
MDX117 | 55C MMLV-RT | 0.05mL;0.2mL 1mL;10mL |
邁迪安(Meridian)可凍干MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
MDX042 | Lyo-Compatible MMLV-RT | 8µL 80µL |
邁迪安(Meridian)含RNA酶抑制劑的MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
MDX043 | RNase-Tolerant MMLV-RT | 200 µL 2 mL 210 mL |
邁迪安(Meridian)MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
MDX044 | MMLV-RT | 200 µL 2 mL |
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