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原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)主要區(qū)別是什么?

更新時間:2023-09-19點擊次數(shù):2360

你知道原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)主要區(qū)別是什么嗎?讓我們一起來看看吧!

一、原代培養(yǎng)

原代培養(yǎng)即第一次培養(yǎng),是指將培養(yǎng)物放置在體外生長環(huán)境中持續(xù)培養(yǎng),中途不分割培養(yǎng)物的培養(yǎng)過程。有幾方面含義:

1.養(yǎng)物一經(jīng)接種到培養(yǎng)器皿(瓶)中就不再分割,任其生長繁殖;

2.原代培養(yǎng)中的“代"并非細胞的“代"數(shù),因為培養(yǎng)過程中細胞經(jīng)多次分裂已經(jīng)產(chǎn)生多代子細胞;

3.原代培養(yǎng)過程中不分割培養(yǎng)物不等于不更換培養(yǎng)液,也不等于不更換培養(yǎng)器皿。

正常細胞培養(yǎng)的世代數(shù)有限,只有癌細胞和發(fā)生轉(zhuǎn)化的細胞才能無限生長下去。所謂轉(zhuǎn)化即是指正常細胞在某種因子的作用下發(fā)生突變而具有癌性的細胞。世界上許多實驗室所廣泛傳用的HeLa細胞系就是1951年從一位名叫Henrietta Lacks的婦女身上取下的宮頸癌細胞培養(yǎng)而成。此細胞系一直延用至今。原代培養(yǎng)是建立各種細胞系(株)必經(jīng)的階段,其是否成功與組織污染與否、供體年齡、培養(yǎng)技術(shù)和方法、適宜培養(yǎng)基的選擇等多種因素有關(guān)。由于原代培養(yǎng)的細胞轉(zhuǎn)化性極小,對病毒敏感性好,因此適應(yīng)制備疫苗等生物制品;但也存在有潛在外源因子、不能事先檢查標本、且受供體年齡健康狀況的影響而導(dǎo)致批間差異大等缺陷。常用的原代細胞培養(yǎng)有雞胚成纖維細胞及豬腎、猴腎、地鼠腎等原代細胞。

原代培養(yǎng)的基本過程包括取材、培養(yǎng)材料的制備、接種、加培養(yǎng)液、置培養(yǎng)條件下培養(yǎng)等步驟,在所有的操作過程中,都必須保持培養(yǎng)物及生長環(huán)境的無菌。

多數(shù)情況下,分散的細胞若屬于貼壁依賴型細胞,就能黏附、鋪展于培養(yǎng)器皿和載體表面生長而形成細胞單層,這種培養(yǎng)方式稱為單層細胞培養(yǎng)(monolayerculture),又叫貼壁培養(yǎng)(adherentculture)。少數(shù)情況下,培養(yǎng)的細胞沒有貼壁依賴性,可通過專門設(shè)備使細胞始終處于懸狀態(tài)而在體外生長,這種形式稱為懸浮培養(yǎng)(suspensionculture)。如何讓接種的細胞盡快貼壁,是決定培養(yǎng)成功的關(guān)鍵步驟:

1.取決于適當(dāng)?shù)纳L基質(zhì)表面;

2.可降低接種后培養(yǎng)液對細胞的浮力,如先少補加少量培養(yǎng)液,待細胞貼壁后再補足營養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);

3.注意適當(dāng)?shù)募毎臃N密度,一般105個/ml左右。

體外培養(yǎng)技術(shù)中所謂的傳“代"概念并不等于細胞生物學(xué)中“親代細胞"與“子代細胞"中“代"的概念。傳代培養(yǎng)的實質(zhì)就是分割后再一次培養(yǎng),可以相對地衡量培養(yǎng)物的培養(yǎng)年齡。

二、傳代培養(yǎng)

傳代培養(yǎng)是組織培養(yǎng)常規(guī)保種方法之一。也是幾乎所有細胞生物學(xué)實驗的基礎(chǔ)。當(dāng)細胞在培養(yǎng)瓶中長滿后就需要將其稀釋分種成多瓶,細胞才能繼續(xù)生長。這一過程就叫傳代。傳代培養(yǎng)可獲得大量細胞供實驗所需。傳代要在嚴格的無菌條件下進行,每一步都需要認真仔細的無菌操作。

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