午夜高清影院免费观看,亚洲欧美国产第一区第二区,亚洲精品午夜久久久,无遮挡又爽又刺激的视频

免費(fèi)咨詢(xún)熱線(xiàn):
技術(shù)文章
首頁(yè) > 技術(shù)中心 > Lipo3000細(xì)胞轉(zhuǎn)染的實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)

Lipo3000細(xì)胞轉(zhuǎn)染的實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)

 更新時(shí)間:2024-04-08 點(diǎn)擊量:16192

細(xì)胞轉(zhuǎn)染常用的轉(zhuǎn)染試劑很多,其中,Lipo3000深受廣大科研工作者的喜愛(ài),那我們來(lái)看看Lipo3000細(xì)胞轉(zhuǎn)染的實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)吧!

一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

Lipofectamine™ 3000 轉(zhuǎn)染試劑(Thermo Fisher)、Opti-MEM(可以用無(wú)血清的培養(yǎng)基代替)

二、實(shí)驗(yàn)步驟

1.接種細(xì)胞,使其在轉(zhuǎn)染時(shí)達(dá)到7090% 匯合度。

注:對(duì)于HEK293,6孔板一般鋪50萬(wàn)個(gè)細(xì)胞左右。對(duì)于PC9, 24孔板一般鋪5-10萬(wàn)個(gè)細(xì)胞。由于不同細(xì)胞,生長(zhǎng)狀況不太一樣,需要根據(jù)情況調(diào)整。

2. 使用Opti-MEM培養(yǎng)基稀釋Lipofectamine3000 劑,充分混勻。

3.使用Opti-MEM培養(yǎng)基稀釋DNA,制備 DNA 預(yù)混液,然后添加P3000 試劑,充分混勻。

4.將上面兩步溶液合在一起,混勻并孵育10-15mins。

5.將混勻后的溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中,并輕輕搖晃培養(yǎng)基,使其均勻。

6.37°C 孵育細(xì)胞 24 天,然后分析轉(zhuǎn)染細(xì)胞。

轉(zhuǎn)染量:

組分

96

24

6

DNA/

100ng

500ng

2500ng

P3000TM/

0.2μL

1μL

5μL

Lipofectamine™ 3000/

0.150.3μL

0.751.5μL

3.757.5μL

三、注意事項(xiàng)

1.Opti-MEM需要37℃水浴鍋預(yù)熱。

2.轉(zhuǎn)染 siRNA 至細(xì)胞時(shí),在稀釋 siRNA 時(shí)不要加入 P3000 試劑。

3.關(guān)于Lipo3000的用量,比如6孔板推薦用量有兩個(gè)3.75ul7.5ul,最di看轉(zhuǎn)染xiao率,最高看細(xì)胞耐受。

4. Opti-MEMLipo3000預(yù)混及Opti-MEM、質(zhì)粒及P3000預(yù)混,都不需要各自孵育,而且兩者混合后孵育時(shí)間最多不要超過(guò)15mins。

5.轉(zhuǎn)染中和轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞培養(yǎng)基中最好不要含有雙抗。

對(duì)于比較好轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,如HEK293,而且需要大量轉(zhuǎn)染的時(shí)候,可以使用PEI進(jìn)行轉(zhuǎn)染,畢竟Lipo3000比較貴。例如,在做CO-IP實(shí)驗(yàn)時(shí),需要10cm皿轉(zhuǎn)染好幾種質(zhì)粒,就可以用PEI進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。CO-IP步驟見(jiàn)免疫共沉淀Co-IP實(shí)驗(yàn)步驟。

更多有關(guān)Lipo3000細(xì)胞轉(zhuǎn)染的實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)的內(nèi)容,請(qǐng)聯(lián)系Lipo3000細(xì)胞轉(zhuǎn)染代理——北京百奧創(chuàng)新科技有限公司:

image.png



国产高新无码在线观看| 亚洲中文字幕无码一区| 日韩欧美亚洲中文字幕区在高我| 国产精品一区二区无久久久| 国产精品久久久久九九九九不卡| 接下来开始上伦理课免费观看| 韩国三级电影视频网站| 久久99国产精品综合| 中文字幕久久中文字幕综合网| 亚洲伦理精品国产成人一区| 亚洲一区二区三区中文字幕一本| 亚洲综合精品欧美日韩一区二区三区91| 99精品国产一区二区青青性色| 婷婷色婷婷开心五月四房播播| 亚洲人妻御姐中文字幕| 欧美成人伦理在线播放| 亚洲精品在线观看日韩电影| 日本日本乱码伦视频免费| 国产精品人成在线观看不卡| 91精品一区二区三区蜜臀| 国产在线观看视频一区| 成人网站在线进入爽爽爽| 亚洲国产电影一区二区三区| 日本成人一区二区不卡| 国产三级黄色片观看| 亚洲精品夜夜夜妓女网| 国产精品熟女视频网站| 日韩久久精品一区二区三区介绍| 日本视频免费一区二区| 91精品无码中文字幕在线| 中文人操人人插人免费看视频| 人妻夜夜爽天天爽精品三区| 国产精品一区二区三区三级天堂| 亚洲mm视频网站在线播放| 欧美日韩国产精品视频一区| 国产精品亚洲欧美日韩一区在线| 亚洲欧美久久久精品影院| 久久久成人国产精品麻豆| 了解最新国产精品18久久| 午夜精品久久久久久久久久久| 欧美日韩制服丝袜中文字幕|